Dette er en optisk mikroskopder små lysavvik, eller faseforskyvninger, oppstår under lyspenetrering inn i en ufarget prøve. Disse faseforskyvningene oversettes til et bilde, noe som betyr at når lys passerer gjennom en ugjennomsiktig prøve, lyser faseforskyvningen opp prøven, og skaper et opplyst (lyst) bilde i bakgrunnen.
Fasekontrastmikroskopi gir bilder med høy kontrast når du arbeider med gjennomsiktige prøver, så dette gjelder spesielt for bilder av mikrobielle kulturer, tynne vevsfragmenter, cellevev og subcellulære partikler.
Prinsippet bak operasjonen av fasekontrastmikroskopi er å bruke optiske metoder for å konvertere prøven til et amplitudebilde, som sees gjennom mikroskopets okularer.
PCM kan brukes til å se ufargede celler (også kjent som faseobjekter), noe som betyr at morfologien til cellene opprettholdes og cellene kan observeres i sin naturlige tilstand, med høy kontrast og effektiv klarhet. Dette er fordi hvis prøver er farget og fiksert, vil de drepe de fleste celler, en funksjon som lysfeltlysmikroskopi ikke kan eliminere.
Forskyvninger som oppstår under lysgjennomtrengning, konverteres til amplitudeendringer, noe som forårsaker bildekontrast.
Kombinert med kontrastforsterkende elementer (som fluorescens), gir de en bedre presentasjon av prøvebilder.
Deler av fasekontrastmikroskop
Instrumenteringen til et fasekontrastmikroskop er basert på lysbanen fra mottak av en lyskilde til bildevisualisering.
Derfor består dens sekvens av:
Lyskilde (kvikksølvbuelampe)
gruppeskudd
blenderåpning
kondensator
Ring kondensator
eksemplar
Hensikt
fotoplate
polarisert lys
fase ring
Fasekontrastmikroskopfunksjoner
Endringen forårsaket av det avbøyde spredte (avbøyde) lyset og det uavvikede lyset som når prøven der det absorberes, produseres ved en viss bølgelengde og skaper fargen. Forskjellen forårsaket av spredt lys og absorbert lys kalles amplitudeendringen. Disse amplitudeendringene er følsomme og kan derfor ikke visualiseres av fotografisk utstyr som fasekontrastmikroskopi og er derfor synlige for det menneskelige øyet.
Kondensatoren til et fasekontrastmikroskop har en ugjennomsiktig skive som kalles en ring, mens den gjennomsiktige ringen lager en lyskjegle som passerer gjennom prøven. Når lyset endres, bøyes noe av lyset på prøven på grunn av endringer i optisk tetthet, og danner et bilde på objektivet. Uavbøyd lys vil treffe faseringene på faseplaten, mens avbøyet lys vil savne faseringene som passerer direkte gjennom faseplaten og danner et bilde.
Fasekontrastmikroskoper er designet med objektiver som kan utføre en rekke funksjoner når de brukes sammen med kontrastforsterkende teknikker som fluorescens. Objektivet er plassert i en intern faseplate, som endrer lysabsorpsjon og faseforskyvning (dvs. udiffraktert), og skaper et bredt spekter for å kontrastere prøven og skape sterk kontrast i bakgrunnen.
Anvendelser av fasekontrastmikroskopi
Bestem morfologien til levende celler, for eksempel dyre- og planteceller
Studer mikroorganismers bevegelighet og bevegelsesstruktur
Påvisning av visse mikrobielle elementer som bakterielle endosporer
