En godmikroskopskal ha tre egenskaper:
God oppløsning: Oppløsningsevne refererer til evnen til å produsere separate bilder av tett plasserte objekter slik at de kan skilles ut som to separate enheter. Vedtak:
Omtrent 0,2 mm (200 μm) for det blotte øye
Optisk mikroskop er omtrent 0.2μm
Elektronmikroskopi er omtrent 0,5 nm
. Oppløsningen avhenger av brytningsindeksen. Olje har høyere brytningsindeks enn luft.
God kontrast: kan forbedres ytterligere ved å farge prøven.
God forstørrelse: Dette oppnås ved å bruke konkave linser.
Lysfelt eller lysmikroskopi
Brightfield eller lysmikroskopi produserer mørke bilder mot en lysere bakgrunn.
mørkfeltmikroskopi
Prinsipp: I mørkfeltmikroskopi fremstår objekter lyse mot en mørk bakgrunn. Dette kan oppnås ved å bruke spesielle darkfield-kondensatorer.
Bruksområder: Brukes til å identifisere levedyktige, ufargede celler og tynne bakterier som Spirochaetes som ikke kan observeres ved lysmikroskopi.
fasekontrastmikroskop
Den visualiserer levende celler ved å skape kontrastforskjeller mellom celler og vann. Den konverterer subtile forskjeller i brytningsindeks og celletetthet til lett påviselige endringer i lysintensitet.
Nyttig for å studere:
mikrobiell bevegelse
Bestem formen på levende celler
Oppdag bakterielle komponenter som endosporer og inklusjonslegemer.
Fluorescensmikroskop
Slik fungerer det: Når fluorescerende fargestoffer utsettes for ultrafiolett (UV) lys, eksiteres de og fluorescerer, dvs. de omdanner denne usynlige, kortbølgede strålen til lys med lengre bølgelengde (synlig lys).
Bruksområder: Epifluorescensmikroskopi har følgende bruksområder:
Autofluorescerer når den plasseres under UV-lys, for eksempel cyklosporin
Mikroorganismer belagt med fluorescerende fargestoffer, som atriol orange for malariaparasitter (QBC) og aurinol for Mycobacterium tuberculosis.
Immunfluorescens: Den bruker antistoffer merket med fluorescerende fargestoffer for å oppdage celleoverflateantigener eller antistoffer som binder seg til celleoverflateantigener. Det er tre typer: direkte IF, indirekte IF og flowcytometri.
elektronmikroskop
Den ble oppfunnet av Ernst Ruska i 1931. Den skiller seg fra lysmikroskopi på en annen måte.
Det finnes to typer EM:
Transmission EM (MC-type, undersøker intern struktur, oppløsning 0.5 nm, gir en todimensjonal visning)
Skanning EM (undersøker overflaten med en oppløsning på 7 nm, gir en 3D-visning)
Prinsipper for transmisjonselektronmikroskopi
Prøveforberedelse: Utfør følgende trinn på celler for å forberede svært tynne prøver (20 til 100 nm tykke)
Fiksering: Fikser celler ved hjelp av glutaraldehyd eller tetroksid for å stabilisere dem.
Dehydrering: Prøven dehydreres deretter med et organisk løsningsmiddel som aceton eller etanol.
Innstøping: Prøven er innebygd i en plastpolymer, som deretter stivner til en fast masse. De fleste plastpolymerer er vannuløselige. Derfor må prøvene være fullstendig dehydrert før innstøping.
Seksjonering: Prøven kuttes deretter i tynne seksjoner med en ultramikrotom og seksjonene monteres på metallobjektglass (kobber).
Fryse-etsingsteknikk: Dette er en alternativ metode for å visualisere organeller inne i celler for forberedelse av prøven.
Cellene fryses raskt, deretter oppvarmes → sprukkes ved hjelp av en kniv for å eksponere de indre organellene → sublimeres → dekket med platina- og karbonbelegg.
Tiltak for å forbedre EM-kontrasten inkluderer:
Farging med løsninger av tungmetallsalter som blycitrat og uranylacetat
Negativ farging med tungmetaller som fosfowolframsyre eller uranylacetat.
Skyggelegging: Prøven er belagt med en tynn film av platina eller annet tungmetall i 45 graders vinkel slik at metallet treffer mikroorganismene på kun den ene siden.
